Scanlater Western Blot卡盒使在酶標儀上進行蛋白質(zhì)免疫印跡成像檢測成為可能
產(chǎn)品概述：
目前檢測轉(zhuǎn)印到 WB 膜上蛋白的技術(shù)眾多包括熒光標記、銀染和化學發(fā)光法等；可是每一種技術(shù)都有其局限，人們一直致力于尋找提高 WBs 定量準確度和動態(tài)檢測范圍的技術(shù)方法。這里介紹一種的在 SpectraMax i3X 或 Paradigm 多功能酶標儀上檢測 WBs 膜的蛋白分析方法，Scanlater Western Blot 卡盒使在酶標儀上進行蛋白質(zhì)免疫印跡成像檢測成為可能。膜上使用銪元素-螯合物或標記二抗特異結(jié)合被研究的蛋白。銪元素標記具有長熒光壽命周期，可至1ms 級別，所以熒光的檢測采用時間分辨的模式，從而可以減少來自于自發(fā)熒光和其他短壽命周期的雜光的背景。WBs 膜被置于酶標儀內(nèi)，然后使用 TRF 卡盒進行 WBs 膜優(yōu)化掃描，此方法不涉及酶的檢測加之銪元素-螯合物標記物具有很強的光漂白抗性，因而信號十分穩(wěn)定能至幾周到幾個月。這就允許對膜進行重復掃描以及可能進行不同條帶的強度對比以及根據(jù)標品進行更精確的定量。TRF 檢測方式采用單光子計數(shù)模式，所以理論的動態(tài)檢測范圍為>105；實際應(yīng)用中，動態(tài)檢測范圍則受限于高含量條帶的熒光飽和以及非特異性結(jié)合造成的背景因素。由于不使用CCD，所以此方法不會出現(xiàn)高光溢出現(xiàn)象，而這是化學發(fā)光和普通熒光檢測的常見問題，所以能夠提供非常銳利的條帶和出色的圖像質(zhì)量。這一新穎的多功能酶標儀檢測平臺上的 Scanlater Western Blot 檢測系統(tǒng)以其操作簡便、檢測靈敏和信號的超高穩(wěn)定性，提供了出色的 WBs 檢測性能表現(xiàn)，必將多功能酶標儀在實驗室應(yīng)用方面帶來又一重大突破！
主要特點：
1.靈敏度：能夠檢測超低含量的人類細胞當中的內(nèi)源性的磷酸化和泛素化的蛋白
2.背景消除：銪元素時間分辨熒光標記，具有超長熒光壽命，至1ms級，使用TRF檢測模式能夠極大地降低自發(fā)熒光和其他來源的背景噪聲
3.節(jié)省時間：無需進行ECL般的耗時優(yōu)化過程
4.降低成本：不再需要成本高昂的X-射線膠片和顯影劑
5.即插即用：可隨時在 SpectraMax® i3X 或 SpectraMax Paradigm 多功能酶標儀上進行高性能 WB 檢測，極大地擴展了其在實驗室研究方面的應(yīng)用
應(yīng)用領(lǐng)域：
Western Blot 檢測、蛋白表達、豐度、修飾檢測、條帶灰度分析等。
實驗舉例：
基于 Scanlter 卡盒全面探索細胞熱應(yīng)激反應(yīng)：正常細胞長時間暴露在高溫環(huán)境下會引起細胞凋亡，同樣也會提高細胞 HSP70（Heat Shock Protein）的表達量。在一款微孔板檢測平臺 i3x 中同時進行細胞增殖的成像分析和 HSP-70 蛋白量檢測等，通過多種方式檢測細胞功能，如細胞熱激反應(yīng)
